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桶裝水中銅綠假單胞菌檢測及控制

發(fā)布時(shí)間：2021-04-16點(diǎn)擊量： 1113作者：陜西欣諾華生物

銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一種重要的水源性條件致病菌，廣泛存在于各類(lèi)型水中，欣諾華生物工程師提示大家，因為對消毒劑、干燥、紫外線(xiàn)燈理化因素具有較強的抵抗力，可引起急性腸道炎、腦膜炎、敗血癥和皮膚炎癥等疾病。近年來(lái)，銅綠假單胞菌污染桶裝水的情況報道較多，是市面上包裝飲用水zui容易出現的質(zhì)量問(wèn)題；2018年山東、江蘇、貴州、廣東等多省市瓶（桶）裝飲用水不合格率高發(fā)，主因是銅綠假單胞菌超標嚴重，該項目政府抽檢不合格率遠超其他抽檢項目，質(zhì)量安全問(wèn)題十分嚴重，主要原因是生產(chǎn)企業(yè)沒(méi)有做好日常生產(chǎn)過(guò)程的微生物監控，生產(chǎn)過(guò)程的消毒效果缺乏準確的驗證方法，使得生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量失控。

根據GB8538-2016食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法是國家zui新公布的針對包裝飲用水銅綠假單胞菌的檢驗方法，檢驗程序如下：

標準的檢測過(guò)程寫(xiě)的比較精煉，對于一般生產(chǎn)企業(yè)的檢測人員來(lái)說(shuō)在實(shí)際的檢測過(guò)程中，會(huì )遇到比較多的問(wèn)題，以下來(lái)對其中的可能的檢測難點(diǎn)一一說(shuō)明并推薦相應的解決辦法。

具體操作步驟

1 水樣過(guò)濾

取好的水樣需在100級的潔凈工作臺用0.45um的濾膜進(jìn)行抽濾，將微生物截留在濾膜上，再將濾膜貼在CN瓊脂培養基上進(jìn)行培養，應避免在濾膜和培養基之間夾留氣泡。

這個(gè)步驟中有兩個(gè)方面檢測方法中未說(shuō)明，一是采用何種濾器和如何滅菌，二是濾膜如何滅菌。

包裝水生產(chǎn)企業(yè)可以購買(mǎi)專(zhuān)用的多聯(lián)不銹鋼過(guò)濾系統，一般材質(zhì)是不銹鋼的，可以用牛皮紙包好后直接放入滅菌鍋內進(jìn)行滅菌；也可以購買(mǎi)常見(jiàn)的砂芯過(guò)濾器，同樣可以用牛皮紙包好后放入滅菌鍋滅菌；如果需要使用的濾器數量較多，可以采用高溫火焰噴槍灼燒方式滅菌，也可起到滅菌效果。濾膜可采用一次性無(wú)菌濾膜。

多聯(lián)不銹鋼過(guò)濾系統

無(wú)菌濾膜

無(wú)菌微孔濾膜

2 濾膜在CN瓊脂培養和觀(guān)察

CN瓊脂培養后的菌落形態(tài)分以下三種，其它情況為非銅綠假單胞菌：

（1）藍色或綠色的典型可疑菌落，直接做綠膿菌素的確證性實(shí)驗，這個(gè)現象比較明顯，也容易辨認；

CN培養基上綠色菌落

綠膿菌素確證

（2）非藍綠色而在365nm紫外燈照射下產(chǎn)熒光的菌落，這種類(lèi)型的可疑菌落需進(jìn)行乙酰胺肉湯確證性實(shí)驗；

CN培養基上非藍綠色而在365nm紫外燈照射下產(chǎn)熒光的菌落

乙酰胺確證試驗

（3）是紅褐色菌落紫外燈照射下也不產(chǎn)熒光，需進(jìn)行氧化酶測試、乙酰胺液體培養基確證，金氏B培養基確證。

所有三種情況均需接種到營(yíng)養瓊脂培養基上進(jìn)行純化。

根據日常檢測數據的統計，前兩種的情況較多，第三種情況zui少，而第二種即非藍/綠色的產(chǎn)熒光的菌落zui具有迷惑性，也是檢驗的難點(diǎn)所在，需要特別仔細的進(jìn)行驗證。

典型菌落的形態(tài)周?chē)尸F融化的狀態(tài)，菌落數較少的情況下，劃線(xiàn)純化比較簡(jiǎn)單；菌落數較多的情況劃線(xiàn)就比較麻煩了，因為第一種典型可疑菌落是直接目測能看到的，而第二種情況產(chǎn)熒光是需要在360nm的紫外燈照射下才能看見(jiàn)是否產(chǎn)熒光，這就會(huì )可能導致劃線(xiàn)純化的時(shí)候可疑和典型菌落出現混淆錯劃的情況，會(huì )導致結果的截然不同。例如：挑取藍綠色可疑菌落純化時(shí)，因菌落溶解狀擴大，可能挑取時(shí)不僅挑取到了藍綠色可疑菌落，還挑取到其他類(lèi)型可疑菌落，純化后確證就可能導致結果完全改變的情況，解決辦法是在這種菌落較多的情況下，可以采取計數后分開(kāi)再在CN瓊脂平板上劃線(xiàn)一次，先在CN瓊脂平板上分離中上述幾種菌落的單個(gè)菌落，再劃線(xiàn)接種到營(yíng)養瓊脂平板上純化后進(jìn)行確證試驗，已避免因挑取典型菌落出現差錯導致結果的偏差。

3 確證性試驗

這里需特別注意的是上述的第二種情況，即非藍/綠色產(chǎn)熒光的可疑菌落的產(chǎn)氨實(shí)驗：

純培養物接種到乙酰胺液體培養基36℃培養20～24h后，滴加1～2滴鈉氏試劑，檢查產(chǎn)氨實(shí)驗，有出現從深黃色到磚紅色的顏色變化，則為陽(yáng)性，否則為陰性。

在實(shí)際過(guò)程中會(huì )發(fā)現確證試驗出現這種顏色變化過(guò)程的比例很高，是很多都是陽(yáng)性結果

經(jīng)過(guò)使用生化試劑條鑒定發(fā)現有近六成的比例并不是銅綠假單胞菌，是什么原因呢，主要是時(shí)間的問(wèn)題，時(shí)間比較久時(shí)，磚紅色出現的幾率比較高，會(huì )影響檢測人員的判斷，建議在3～5分鐘內進(jìn)行觀(guān)察，并且一定要與陽(yáng)性和陰性對照菌株進(jìn)行比較觀(guān)察，可有效降低誤判。另外推薦一種簡(jiǎn)單的方法：如覺(jué)得還有疑問(wèn)不能判定，可以從純培養物接種劃線(xiàn)到固體乙酰胺培養基進(jìn)行培養，銅綠假單胞菌在固體培養基上的特征是灰白色，扁平，邊緣不整齊，菌落周?chē)囵B基略帶粉紅色，可以結合固體和液體培養基的生長(cháng)特征和現象進(jìn)行判定，誤判基本可以消除，此方法成本很低，一般的生產(chǎn)企業(yè)可以使用。

銅綠假單胞菌的污染主要來(lái)自三個(gè)方面，一是水源的污染，二是加工過(guò)程的污染，三是包裝材料的污染，作為生產(chǎn)企業(yè)，需要通過(guò)提高自身的檢測能力，分別監測這三個(gè)方面的污染情況，采取有效的消毒滅菌方式，并驗證滅菌效果，可確保生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量安全有保障。

欣諾華生物—清潔消毒產(chǎn)品專(zhuān)業(yè)制造商：陜西欣諾華生物科技有限公司專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)食品接觸用消毒劑，食品管道CIP清洗劑產(chǎn)品，可為客戶(hù)提供完整的清潔消毒解決方案，主要產(chǎn)品有三橋牌食品工業(yè)酸性清洗劑，三橋牌食品工業(yè)堿性清洗劑，三橋牌CIP酸堿清洗劑，三橋牌食品級過(guò)氧乙酸消毒液，欣諾華牌食品級二氧化氯消毒粉，欣諾華牌食品級次氯酸鈉消毒液，欣諾華牌食品級過(guò)氧化氫消毒液，欣諾華牌食品級75%酒精消毒液，欣諾華牌復合季銨鹽消毒液，欣諾華牌過(guò)氧化氫銀離子消毒液產(chǎn)品，公司始創(chuàng )于1994年，已經(jīng)為全國200多家食品加工企業(yè)提供了相應的產(chǎn)品和服務(wù)。



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